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单克隆抗体两次筛选,单克隆抗体两次筛选的目的和方法

交换机 01-28 46
单克隆抗体两次筛选,单克隆抗体两次筛选的目的和方法摘要: 大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于单克隆抗体两次筛选的问题,于是小编就整理了3个相关介绍单克隆抗体两次筛选的解答,让我们一起看看吧。为什么制备单克隆抗体时要用已免...

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于单克隆抗体两次筛选的问题,于是小编就整理了3个相关介绍单克隆抗体两次筛选的解答,让我们一起看看吧。

  1. 为什么制备单克隆抗体时要用已免疫的B淋巴细胞,为什么用选择培养基选出杂交瘤细胞后还要进行抗体阳性检测?
  2. 杂交瘤细胞的筛选方法和原理?
  3. 制备单克隆抗体时先在什么条件下进行体外培养?

为什么制备单克隆抗体时要用已免疫的B淋巴细胞,为什么用选择培养基选出杂交瘤细胞后还要进行抗体阳性检测?

书上说的B淋巴细胞是指效应B细胞(浆细胞),只有已免疫的B淋巴细胞(即效应B细胞)才能分泌抗体。

浆细胞有专一性,还要进行抗体阳性检测是因为:第一次用选择培养基筛选出的杂交瘤细胞有多种,因为当初取自小鼠脾脏的效应B细胞有多种,总共能分泌多种不同抗体,这次筛选只是去处未融合细胞和同种融合细胞,所以最后体内体外培养前还有一步分离各种杂交瘤细胞,专一抗体阳性检测是为了保证我们现在所需要制备的这种单克隆抗体一直存在,避免实验操作失误导致产生的这种单克隆抗体的杂交瘤细胞死亡。

单克隆抗体两次筛选,单克隆抗体两次筛选的目的和方法
(图片来源网络,侵删)

杂交瘤细胞的筛选方法和原理?

杂交瘤细胞的筛选方式:

第一,在HAT培养基中进行选择性培养,只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,因此,能在HAT培养基中存活和增殖。经过克隆选择,可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。

第二,仅仅就“两个细胞的融合”而言有三种,有瘤-瘤型融合细胞、瘤-B融合细胞、B型融合细胞。

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制备单克隆抗体时先在什么条件下进行体外培养?

制备过程 编辑 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。

一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,***相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合 ***用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般***用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常***用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。***用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要***用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量。

到此,以上就是小编对于单克隆抗体两次筛选的问题就介绍到这了,希望介绍关于单克隆抗体两次筛选的3点解答对大家有用。

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