植物内参抗体,植物内参抗体有哪些

摘要： 大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于植物内参抗体的问题，于是小编就整理了3个相关介绍植物内参抗体的解答，让我们一起看看吧。western blot电泳时内参上样量怎...

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于植物内参抗体的问题，于是小编就整理了3个相关介绍植物内参抗体的解答，让我们一起看看吧。

1. western blot电泳时内参上样量怎么确定？
2. pcr核质分离步骤？
3. 为什么要做wb？

western blot电泳时内参上样量怎么确定？

　　内参一般情况下的定义是正常样品中本来就有的相对更为稳定存在分子。　　所以，你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”，然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量，再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体（内参抗体、目标蛋白的特异性抗体）孵育就可以很放心地做后续分析了。

pcr核质分离步骤？

核质分离

核质分离是检测某种RNA或蛋白质在细胞质和细胞核中含量的一种方法，根据细胞膜和核膜溶解的难易用不同强度的裂解液溶解细胞，达到细胞质和细胞核物质分离的效果。分离的产物通过q-pcr或WB分别检测目的RNA或蛋白在细胞质和细胞核中的含量。

核质分离质控标准：

核质分离提取RNA用actin和U6的mRNA作为内参，actin mRNA基本位于细胞质中，U6 mRNA基本位于细胞核。分离的RNA产物用actin和U6进行q-pcr检测，确定核质分离是否成功。

核质分离提取蛋白用Histone和GAPDH作为内参标准，Histone基本位于细胞核内，GAPDH基本位于细胞质中。分离提取的蛋白产物分别用Histone和GAPDH抗体进行WB检测核质分离分离是否成功。

为什么要做wb？

WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如何正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，与抗原更加有效的结合，从而获得特异性和非特异性背景之间差异的最大化。每一个抗体都有其特性，因此我们必须通过WB预实验获得背景小，非特异性条带少的实验结果。

预实验的内容如下：1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；2）选择合适的封闭液及封闭时间；3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

到此，以上就是小编对于植物内参抗体的问题就介绍到这了，希望介绍关于植物内参抗体的3点解答对大家有用。