wb抗体选择,wb抗体选择单克隆还是多克隆

摘要： 大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于wb抗体选择的问题，于是小编就整理了4个相关介绍wb抗体选择的解答，让我们一起看看吧。WB实验中封闭液一般用多大浓度？wb膜是什...

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于wb抗体选择的问题，于是小编就整理了4个相关介绍wb抗体选择的解答，让我们一起看看吧。

1. WB实验中封闭液一般用多大浓度？
2. wb膜是什么？
3. wb内参怎么用？
4. wb实验步骤及原理？

WB实验中封闭液一般用多大浓度？

封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。

1、脱脂奶粉

最便宜而且最好买的封闭剂就属脱脂奶粉了。通常封闭液的浓度为 2.5-5% （w/v）。

2、牛血清白蛋白(BSA)

牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白，通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5%（w/v）。

3、全血清

全血清是许多蛋白质的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同样可以被用来当做封闭剂。通常使用的浓度为 5-10%（w/v）。

wb膜是什么？

wb膜就是用WB技术做出来的几种膜，有Nc膜，尼龙膜，PVDF膜。

WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB***用抗体作为探针，抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析，旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。

wb内参怎么用？

WB实验中应该如何使用内参？

✦ 简易标记法

只要在二抗孵育时加入 HRP 标记内参抗体，按照正常操作即可。

✦ Stripping 和 Reprobing

确定内参表达的常用方法是 Stripping 和 Reprobing。行目的蛋白的抗体孵育显色和检测。然后使用 Strip 缓冲液洗掉膜上的抗体，再用内参特异性抗体重新检测。

在 Strip 之后，为了确认完全的抗体去除，膜应洗涤、封闭，然后用二抗染色。如果 Strip 完成，二抗将不产生检测信号。如果检测到信号，则必须优化 Strip 条件。

1. 选择内参抗体需要考虑分子大小和表达量。

2. 确定内参表达的常用方法是Stripping和Reprobing。

3. 剪膜实验需要在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分。

4. 内参抗体与目的蛋白分子量大小相当时，WB结果无法直接观察，需要进行准确数据的分析。

wb实验步骤及原理？

Western Blot 实验原理

WB 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

Western Blot 分类

根据显色方法主要有以下几种：

放射自显影

到此，以上就是小编对于wb抗体选择的问题就介绍到这了，希望介绍关于wb抗体选择的4点解答对大家有用。