产生单克隆抗体的细胞,产生单克隆抗体的细胞会不会出现接触抑制
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单克隆抗体的制备步骤?
单克隆抗体制备的基本流程
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
(2)细胞融合
***用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般***用HAT选择性培养基。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。
单克隆抗体的制备原理和方法?
单克隆抗体(Monoclonal Antibody,简称mAb)是一种特异性强、灵敏度高且可大量制备的免疫球蛋白。它是由单一B淋巴细胞克隆所产生的针对某一特定抗原表位的高度特异性抗体。制备单克隆抗体的原理和方法如下:
原理:
单克隆抗体的制备基于B淋巴细胞的杂交瘤技术。在这个过程中,一个经过免疫的B淋巴细胞与一个癌细胞(通常是小鼠的脾细胞)融合,形成一个杂交瘤细胞。这个杂交瘤细胞具有两个亲本细胞的特性:B淋巴细胞能够产生抗体,而癌细胞能够无限增殖。通过筛选和克隆化,可以得到大量产生特定抗体的杂交瘤细胞。
方法:
1. 免疫动物:首先将目标抗原注射到免疫动物(如小鼠)体内,使其免疫系统产生对该抗原的免疫反应。
2. 提取B淋巴细胞:从免疫动物体内提取已免疫的B淋巴细胞。
3. 细胞融合:将提取的B淋巴细胞与癌细胞(如小鼠的脾细胞)在物理或化学因素作用下进行融合,形成杂交瘤细胞。
4. 筛选杂交瘤细胞:将融合后的细胞放入培养基中,使其不断增殖。然后从培养液中筛选出能够产生特定抗体的杂交瘤细胞。这些细胞具有较高的亲和力和特异性,能够大量分泌目标抗体。
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